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細胞培養常規方法
日期：2025-12-13 03:09
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摘要：細胞培養常規方法
細胞培養常規方法
CELLCELL 2015-10-08
1. 凍存細胞的復蘇
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應遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調至37-37。5度，取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。
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在無菌臺內將完全培養基加入50ml的小培養瓶內，約5ml左右，然后用無菌吸管從凍存管內取出細胞，置培養并內輕輕搖晃，使細胞均勻后置培養箱內培養。
2. 傳代:
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貼壁細胞:
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懸浮細胞:
對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據經驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml完全培養基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養瓶內，加入完全培養基后繼續培養或實驗。
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內，加入完全培養基繼續培養，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入完全培養基，輕輕吹勻后，分置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養。
3. 凍存
將貼壁細胞消化后離心收集，懸浮細胞直接離心收集，以完全培養基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。
