細胞培養中常見的污染情況及解決方法

1. ** ：**在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染**的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。

解決方法 ：仔細檢查一下器皿的**情況，是否在高壓**時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！可在培養液中加相應的***處理，如四環素，慶大霉素，或者鏈霉素。

2. 霉菌 ：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態變差。

解決方法 ：用硫酸銅溶液擦拭CO?孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的**磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

CO?孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節。

其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。

預防霉菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環境徹底**，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。

3. 支原體 ：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中*常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

解決方法 ：支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要**支原體，常用方法有：***處理、抗血清處理、***加抗血清和補體聯合處理。要注意的是：支原體沒有細胞壁，故作用于細胞壁生物合成的***，如內酰胺類、萬古霉素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺**普遍耐火藥。對支原體*有抑制活性***是四環素類、大環內酯類等，氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養用物。通常，濾過**的方法對支原體是沒有作用的。

4. 黑蛟蟲 ：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。

解決方法 ：對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。

5. ** ：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些**開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。**生長的比較慢，不象**那么容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

解決方法 ：果斷扔掉，然后徹底****培養間， CO?孵箱，器皿和培養液。

6. 原蟲 ：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。它們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的，但它們的數量小，細胞占優勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當它們到達一定的數量時就會影響到 細胞 的生長，*終形成惡性循環。

污染的可能原因：可能原因很多比如配液**問題、操作問題、環境問題等等 。

關于培養基的無菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37度試培養一段時間后觀察。如果沒有**生長 就是操作的問題。 

也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時會影響細胞的狀態，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。  

1、孵箱應定期用三氧機** 或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水 

2、超凈臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素 

3、超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染 

4、無菌室經甲醛熏蒸**后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。